小鼠神經(jīng)干細胞細胞說明書

更新時間：2011-11-23 瀏覽次數(shù)：2709

長期以來，中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病一直是困擾人類健康的一大難題。1992年，Reynodls

^【¹^】等從成年小鼠腦紋狀體中分離出能在體外不斷分裂增殖，且具有多種分化潛能的細胞群，并正式提出了神經(jīng)干細胞（Neural stem cells, NSCs）的概念，從而打破了認為神經(jīng)細胞不能再生的傳統(tǒng)理論。NSCs的發(fā)現(xiàn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷疾病的治療及其傷后功能重建帶來了曙光。1997年 Mckay將 NSCs的概念總結(jié)為：具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞及少突膠質(zhì)細胞的能力，能自我更新并可以提供大量腦組織細胞^【²^】。隨著 NSCs在醫(yī)學和研究領(lǐng)域的應(yīng)用逐漸增多，利用穩(wěn)定的 NSCs細胞株，可以為關(guān)于 NSCs的深入研究包括細胞的活動、正常與非正常狀態(tài)等，以及體外構(gòu)建神經(jīng)組織代謝性疾病和腦組織損傷的藥物篩選模型，提供可靠的細胞資源，同時為研究工作節(jié)約寶貴的時間和培養(yǎng)費用。

本公司培養(yǎng)出品的取自 SPF級的孕齡 14天的 ICR小鼠（*軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心，許可證號：SCXK-（軍）2007-004）胚胎大腦的 SVZ區(qū)，用 DFR03神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基（貨號： M1024）進行原代培養(yǎng)。傳代擴增至第二代凍存（DIV15），每支含 1×10⁶個細胞。細胞經(jīng)檢測，鏡下成球形生長（如圖 1所示）；單克隆實驗及 Brdu染色證明其具備良好的增殖能力（如圖 2,圖 3所示）；免疫熒光化學實驗表明，該細胞能表達 NSCs的標志性蛋白 nestin（如圖 4所示）；5%胎牛血清誘導可分化稱為神經(jīng)元（neuron）、星形膠質(zhì)細胞（astrocyte）（如圖 5所示）。品名：ICR小鼠神經(jīng)干細胞貨號：C3016規(guī)格：1×10⁶cells/管產(chǎn)品特性：

1. SPF級的孕齡 14天的 ICR小鼠胚胎大腦的 SVZ區(qū)

2. 在特定的已知成分的無血清培養(yǎng)基可自我更新，倍增時間小于 48小時。

3. 在體外具有多分化潛能

4.穩(wěn)定的正常二倍體細胞。質(zhì)量控制：本產(chǎn)品經(jīng)過了細菌、真菌、霉菌、支原體檢測。運輸與保存：

本品使用 10%DMSO凍存液冷凍，采用干冰保存運輸，收到細胞后，如果不立即復蘇，請將細胞放入液氮中保存待用。切勿置于室溫下，以免造成 DMSO損傷。細胞復蘇方法：

取出凍存管后，投入 37℃水浴中，震蕩解凍，酒精消毒管壁外側(cè)后，將其轉(zhuǎn)入超凈臺中，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至離心管中，加入 5mlDFR03神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基， 1000轉(zhuǎn)，離心 5分鐘，棄去上清，在加入 5mlDFR03神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。產(chǎn)品承諾：

實驗室研究結(jié)果表明，本株 ICR小鼠 SVZ來源的 NSCs體外增殖 10代后，仍能夠保持神經(jīng)干細胞良好的特性。建議使用本公司配套的培養(yǎng)基和正確的培養(yǎng)方法來解凍、傳代，以此保證細胞具備良好的增殖和分化能力。使用：

本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用，不可應(yīng)用于臨床。附圖（供參考）

圖 1.體外培養(yǎng) 15天（ DIV15），第二代 NSCs在培養(yǎng)基中懸浮成球生長圖 2在 1%膠原水凝膠中 NSCs由單個細胞形成克隆球

圖 3.BrdU熒光染色

圖 4.原代 NSCs的 nestin染色陽性

圖 5.由 NSCs誘導分化得到的神經(jīng)元（β -tubulin III陽性 ,綠色）和星形膠質(zhì)細胞（ GFAP陽性，紅色）

參考文獻

【1】 Reynolds BA, Weiss S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science,1992, 255（5052）:1707-1710.

【2】 McKay R. Stem cells in the central nervous system. Science, 1997,276（5309）:66

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